Ротавирусна инфекция

Грип

Ротавирусна инфекция или чревен / стомашен грип е инфекциозно заболяване със симптоматично лечение. Ротавирусната инфекция е най-често при деца.

Ротавирусната инфекция представлява особена опасност за децата, тъй като повечето инфекции се срещат именно в тази популация.

Причинителен агент на ротавирусна инфекция

Инфекцията се причинява от ротавируси - вируси от семейство Reoviridae, които са сходни помежду си в антигенен състав.

Източник на инфекция

Източникът на инфекция е болен човек. Най-опасно от гледна точка на предаване на инфекцията е пациентът през първите 3 - 5 дни от клиничните прояви на ротавирусна инфекция, тъй като през този период съдържанието на вируса в отделените изпражнения е най-голямо.

Трансмисионен механизъм

Основният механизъм на предаване на вируса е фекално-орален, по-рядко - контактно-битовият път на размножаване чрез прехвърляне на ротавирус със заразени обекти. Особено опасни в това отношение са млечните продукти. Ниските температури обикновено не разрушават вируса, така че съхраняването на храна в хладилника не пречи на развитието на ротавирусна инфекция.

Период на епидемична ротавирусна инфекция

Избухването на болестта настъпва в есенно-зимния период, но в други сезони може да има и случаи на възникване на заболяването. Като правило, разпространението и появата на характерни симптоми на ротавирусна инфекция е придружено от появата на грипна епидемия, затова хората са заразени с ротавирус, по-известен като "чревен грип".

патогенеза

След като влезе в човешкото тяло, вирусът навлиза в клетките на лигавицата на тънките черва, което причинява разрушаване на чревните вълни. Синтезът на специфични ензими, както и нарушаването на секреторната функция на чревната лигавица, води до тежка диария и дехидратация на тялото поради голямото количество електролити и вода, постъпващи в чревния лумен.

Симптоми на ротавирусна инфекция:

  • назална конгестия;
  • възпалено гърло;
  • кашлица;
  • коремна болка;
  • гадене, повръщане, диария;
  • главоболие, треска.

клиника:

Основните периоди на ротавирусна инфекция:

  • инкубационният период е 1-2 дни;
  • остър период трае 3-7 дни;
  • възстановяване, продължава 4-5 дни.

Заболяването се характеризира с остро начало, но е възможно наличието на продромален период (около 2 дни). Може да предизвика неразположение, обща слабост, главоболие, повишена умора, загуба на апетит, неприятни усещания и тътен в стомаха. В допълнение, развитието на прояви на заболяването от страна на горните дихателни пътища е възможно: назална конгестия, възпалено гърло, лека кашлица.

Общата клинична картина включва синдромите на интоксикация, гастроентерит и лезии на горните дихателни пътища.

Проявите на синдрома на гастроентерита включват: силен трясък в корема, болка, най-вече в горната част на корема, гадене, повръщане, диария. Диарията с ротавирусна инфекция има водна пенлива консистенция и е с жълт или зеленожълт цвят.

Прояви на синдром на интоксикация: умора, слабост, главоболие. При тежки случаи: замаяност, припадък.

Поражението на горните дихателни пътища се характеризира с хрема, запушване на носа, възпалено гърло, кашлица. Зев, когато има яркочервен цвят.

Усложнения и смъртност

Тежките форми на заболяването, придружени от тежка дехидратация, се характеризират с развитие на сърдечносъдова недостатъчност, дори смърт (в 2-3% от случаите). След инфекцията се създава нестабилен имунитет, който с времето отслабва, така че е възможно повторно заразяване.

Диагностика на ротавирусна инфекция

Диагностика на ротавирусна инфекция е възможна само когато ротавирусът е открит при хора, като се използват лабораторни диагностични методи като PCR - полимеразна верижна реакция, RPHA - пасивна хемаглутинационна реакция, CSC - свързваща добавка, имунофлуоресценция и много други.

Пълната кръвна картина ще покаже левкоцитоза с неутрофилна лява смяна, повишена ESR - в острия период. За възстановителния период се характеризира с нормализиране на кръвната картина. Анализът на урината ще показва протеинови, левкоцитни и червени кръвни клетки, хиалинови цилиндри в малки количества.

Ротавирусна инфекция - лечение на чревен грип при възрастни и деца

Лечението е симптоматично, тъй като няма специфични антиротавирусни лекарства за борба с ротавируса.

Принципи на лечение на ротавирусна инфекция:

  1. Изолиране на пациент с ротавирусна инфекция
  2. Борба срещу дехидратацията. Желателно е да се използват специални солни разтвори за това, например, рехидрон, физиологичен разтвор. Те се използват при лечението на пациента в болницата, но физиологичен разтвор за възстановяване на нормалното киселинно-основно състояние на тялото може да се приготви у дома: 1 чаена лъжичка на 1 литър вода. Препоръчително е да се пие много минерална вода.
  3. Борбата с температурата трябва да започне при температура 38, 5 и повече. В същото време, в зависимост от вида на треската, е необходимо да се използват физически методи за намаляване на температурата, например, триене на тялото с вода, и химикали - приемане на специфични лекарства, при деца е по-добре да се използват свещи.
  4. Приемане на ензимни препарати, адсорбиращи и стягащи средства (активен въглен, полисорб), млечно-бактериални препарати.
  5. Забранено е да се вземат обезболяващи за болка в корема.

Показания за насочване към болница за ротавирусна инфекция:

  • прогресивно влошаване, продължителна диария;
  • появата на нови симптоми.

Диета за ротавирусна инфекция:

Диета включва избягване на мляко и млечни продукти, включително млечни продукти. Препоръчително е да се включи в диетата пилешки бульон или оризова каша, сварени във вода без добавяне на масло. Необходимо е да се ядат на малки порции с почивки. Препоръчително е да се ограничи приема на храна, богата на въглехидрати.

Профилактика на ротавирусна инфекция

Ключовите превантивни мерки за ротавирусна инфекция включват:

  • Предотвратяване на влизането на вируса в тялото, включително изолиране на болните, редовно измиване на ръцете, хранене на доказани и висококачествени продукти, използване на дестилирана вода, измиване на зеленчуци и плодове;
  • санитарен контрол на заведения за обществено хранене и продукти в магазини, пазари.

Преди да използвате информацията, предоставена от сайта medportal.org, моля, прочетете условията на потребителското споразумение.

Споразумение с потребителя

Сайтът medportal.org предоставя услуги при условията, описани в този документ. Като започнете да използвате уебсайта, вие потвърждавате, че сте прочели условията на настоящото Споразумение с потребителя преди да използвате сайта, и приемате всички условия на настоящото споразумение изцяло. Моля, не използвайте уебсайта, ако не сте съгласни с тези условия.

Описание на услугата

Цялата информация, публикувана на сайта е само за справка, информацията, взета от публични източници, е препратка и не е реклама. Сайтът medportal.org предоставя услуги, които позволяват на Потребителя да търси лекарства в данните, получени от аптеките като част от споразумение между аптеките и medportal.org. За улесняване на използването на данните за мястото на употребата на лекарства, хранителните добавки се систематизират и се довеждат до еднократен правопис.

Сайтът medportal.org предоставя услуги, които позволяват на Потребителя да търси клиники и друга медицинска информация.

ограничаване на отговорността

Информацията, поставена в резултатите от търсенето, не е публична оферта. Администрацията на сайта medportal.org не гарантира точността, пълнотата и (или) приложимостта на показаните данни. Администрацията на сайта medportal.org не носи отговорност за вредите или щетите, които може да сте претърпели от достъп или невъзможност за достъп до сайта или от използването или невъзможността за използване на този сайт.

Като приемате условията на това споразумение, вие напълно разбирате и приемате, че:

Информацията на сайта е само за справка.

Администрацията на сайта medportal.org не гарантира липсата на грешки и несъответствия по отношение на декларираните на сайта и действителната наличност на стоки и цени за стоките в аптеката.

Потребителят се задължава да изясни интересуващата ви информация чрез телефонно обаждане в аптеката или да използва предоставената информация по свое усмотрение.

Администрацията на сайта medportal.org не гарантира липсата на грешки и несъответствия по отношение на работния график на клиниките, техните данни за контакт - телефонни номера и адреси.

Администрацията на сайта medportal.org, нито която и да е друга страна, участваща в процеса на предоставяне на информация, не носи отговорност за каквито и да е вреди или щети, които може да сте претърпели от пълното използване на информацията, съдържаща се на този уебсайт.

Администрацията на сайта medportal.org поема и се задължава да положи допълнителни усилия за свеждане до минимум на несъответствията и грешките в предоставената информация.

Администрацията на сайта medportal.org не гарантира отсъствието на технически повреди, включително по отношение на работата на софтуера. Администрацията на сайта medportal.org се задължава възможно най-скоро да положи всички усилия за отстраняване на всякакви повреди и грешки в случай на възникване.

Потребителят се предупреждава, че администрацията на сайта medportal.org не носи отговорност за посещение и използване на външни ресурси, връзки към които могат да се съдържат в сайта, не дава одобрение за тяхното съдържание и не носи отговорност за тяхната наличност.

Администрацията на сайта medportal.org си запазва правото да прекрати сайта, да промени частично или изцяло неговото съдържание, да направи промени в Споразумението с потребителя. Такива промени се правят само по преценка на Администрацията без предизвестие до Потребителя.

Вие потвърждавате, че сте прочели условията на настоящото Споразумение с потребителя и приемате всички условия на настоящото споразумение изцяло.

Рекламната информация, на която разположението на сайта има съответно споразумение с рекламодателя, се маркира "като реклама".

Ротавирусна инфекция

Ротавирусна инфекция (ротавирусен гастроентерит) е остро инфекциозно заболяване, причинено от ротавируси, характеризиращо се със симптоми на обща интоксикация и увреждане на стомашно-чревния тракт с развитието на гастроентерит.

Код ICD-10
A08.0. Ротавирусен ентерит.

Етиология (причини) на ротавирусна инфекция

Причинителят е член на семейството Reoviridae, род на ротавирус (ротавирус). Името се основава на морфологичното сходство на ротавирусите с колело (от латинското "rota" - "колело"). Под електронен микроскоп вирусните частици приличат на колела с широк център, къси спици и ясно дефиниран тънък ръб. Ротавирусен вирион с диаметър 65-75 nm се състои от електронен плътен център (ядро) и две пептидни черупки: външен и вътрешен капсид. Ядрото от 38-40 nm съдържа вътрешни протеини и генетичен материал, представен от двуверижна РНК. Геномът на ротавирусите при хора и животни се състои от 11 фрагмента, което вероятно е причината за антигенното разнообразие на ротавирусите. Репликацията на ротавирусите в човешкото тяло възниква изключително в епителните клетки на тънките черва.

Ротавирусна инфекция, оглед в електронния микроскоп

В ротавируса са открити четири основни антигена; основният е групата антиген, протеинът на вътрешния капсид. Като се вземат предвид всички специфични за групата антигени, ротавирусите се разделят на седем групи: А, В, С, D, Е, F, G. Повечето човешки и животински ротавируси принадлежат към група А, в която се различават подгрупи (I и II) и серотипове. Подгрупа II включва до 70–80% от щамовете, изолирани от пациентите. Има данни за възможна корелация на някои серотипове с тежестта на диарията.

Ротавирусите са устойчиви на фактори на околната среда: в питейната вода, откритите водни басейни и отпадъчните води, те продължават до няколко месеца, за зеленчуци - 25-30 дни, за памук, вълна - до 15–45 дни. Ротавирусите не се разрушават чрез многократно замразяване, под действието на дезинфекциращи разтвори, етер, хлороформ, ултразвук, но умират при варене, третират се с разтвори с рН по-голямо от 10 или по-малко от 2. Оптимални условия за вируси: температура 4 ° С и висока (> 90%) или low (Автор: Инфекциозни болести: национално лидерство, под редакцията на Н. Д. Ющук, Ю. Я. Венгеров. 2009

Диагнозата на ротавирусна инфекция

аз твърдя
Заместник-началник
Главен епидемиолог
Министерство на здравеопазването на СССР
G.G.ONISCHENKO

7 март 1989 г. N 15-6 / 6

Ротавирусна инфекция

(МЕТОДИЧНИ ПРЕПОРЪКИ)

Институт по полиомиелит и вирусен енцефалит към АМН на СССР.

Изследователски институт по епидемиология на Министерството на здравеопазването на СССР;

Научно-изследователски институт по епидемиология и микробиология. GN Габриевского Министерство на здравеопазването на РСФСР;

Научно-производствено дружество "Ростепидкомплекс";

All-съюз научно-изследователски институт за дезинфекция и стерилизация на Министерството на здравеопазването на СССР.

Насоките са предназначени за практикуващи и изследователи на здравни органи и институции.

Човешкият ротавирус принадлежи към група животински вируси, сходни помежду си, които, в допълнение към нея, включват вируса на телешка диария на небраска (NCDV), вирус на епизоотична диария на млади мишки (EDJM), вируса на маймуни (SA-II), вирус, произхождащ от чревното съдържание на овце и говеда (0), както и патогените на прасета от диария, жребчета, кученца и други животни. Всички тези вируси имат еднакъв размер и форма и са близки един до друг в антигенни термини.

Ротавирусните животни се размножават добре в тъканната култура, следователно са изолирани и изследвани преди човешки ротавирус. Ротавируси от телета и маймуни, поради тяхната антигенна близост до човешки ротавирус, бяха използвани за установяване на неговата етиологична роля при остър гастроентерит и са използвани досега в тяхната серологична диагностика и за получаване на имунореагенти.

Човешкият ротавирус се открива с електронна микроскопия в дуоденални епителни клетки и в екстракти от фекалии на типични пациенти, където често се съдържа в много значими концентрации (до 10 частици в 1.0 g фекалии). Ротавирусният вирион е двукапсиден (т.е. покрит с двуслойна протеинова обвивка) сферична частица с диаметър 70 - 75 nm, съдържа рибонуклеинова киселина - РНК (11 двойно-верижни сегмента), има плаваща плътност в цезиев хлорид от 1,36 g / cu. cm с коефициент на утаяване 500 - 530 S

Според наличните характеристики човешкият ротавирус, заедно с изброените по-горе животински вируси, е класифициран като ротавирусен род от семейството Reoviridae. Името "ротавирус" произлиза от латинското рота - колело, което частица от вирус прилича на електронни микроскопични препарати.

Според антигенната специфичност, установена чрез ELISA, ротавирусите се разделят на две подгрупи (обозначени с римски цифри - I и II) и по специфичност, открита в реакцията на неутрализация, с 4 (и вероятно повече) серотипове (означени с арабски цифри - 1 2, 3, 4). Специфичността на подгрупите на някои ротавируси се определя от главния протеин на вътрешния капсид и тяхната серотипова специфичност се определя от гликопротеина на външния капсид. Наскоро бяха открити ротавируси от нов тип (така наречените параротавируси), които нямат специфичен за групата антиген.

Ротавирусната инфекция е широко разпространена. Информация за нейната идентификация е публикувана в Австралия, Великобритания, ГДР, Канада, Индия, Испания, САЩ, Франция, Япония и много други страни. В Съветския съюз са регистрирани заболявания на ротавирусен гастроентерит сред деца и възрастни в редица региони на РСФСР, Закавказие, Украйна, балтийските държави, Централна Азия и други територии. Сред децата и възрастните, ротавирусната инфекция може да се прояви под формата на спорадични случаи, локални групови заболявания и масови огнища с покритие на различни групи от населението на големи площи. Сред хоспитализираните пациенти с остри чревни инфекции делът на възрастните с ротавирусен гастроентерит е средно 10-15%, децата 15–27% или повече. Литературните данни за изолирането на ротавирус (антиген) при здрави деца и възрастни са много противоречиви: от 0 - 0,5 до 42% при деца и от 0% до 7% или повече при възрастни. Ротавирусната инфекция се записва през цялата година. Въпреки това, над 70% от пациентите са открити в студения сезон. През зимно-пролетния период се регистрират и повечето епидемии от ротавирусна инфекция сред населението, както и групови заболявания сред новородени и недоносени бебета, деца от организирани групи, възрастни хора. Нямаше забележими разлики в разпределението на ротавирусните инфекции (както при деца, така и при възрастни) по пол.

Източникът на инфекция при остри чревни инфекции на ротавирусна етиология са заразени възрастни и деца - пациенти с явна форма на инфекция или безсимптомно секретиращи ротавируси с изпражнения. В същото време, деца на първата година от живота често са заразени от майки, заразени с ротавируси, както и от по-големи деца и възрастни от деца на организирани детски групи. Инфекцията на хора от животни не е доказана, въпреки че възможността за това не е изключена. Понастоящем ротавируси от различни серотипове се откриват в екскрети на почти 50 вида животни и птици с изразени признаци на диария и без тях.

Ротавирусите при пациенти и лица без клинични прояви на заболяването понастоящем се откриват само в изпражненията. Пациентите отделят ротавируси в околната среда, започвайки от първия ден на заболяването, докато при всички пациенти се установява максималното количество патоген в изпражненията (до 10-10 вирусни частици на 1 g) през първите пет дни на заболяването, което определя най-големия епидемиологичен риск на пациентите за други. този период на заболяване. През следващите 6 до 10 дни освобождаването на ротавируси с изпражненията на пациентите рязко спада, тъй като изпражненията се нормализират. Средната продължителност на екскрецията на ротавирусите от пациентите е 7–8 дни, но при някои пациенти този период може да продължи до 20-30 дни. Лицата без клинични прояви на заболяването могат да доведат до продължително освобождаване на ротавируси с изпражнения - до няколко месеца или повече (период на наблюдение).

Основният механизъм на предаване на ротавирусите е фекално-орален, който се осъществява чрез водни, хранителни и вътрешни предавателни пътища. При спорадични и локални групови заболявания инфекцията с ротавируси се среща предимно чрез домашни средства. Това допринася за много ниска патогенна доза ротавируси (в рамките на 10 вирусни частици). Установено е, че при различни екологични обекти ротавирусите запазват своята жизнеспособност от 10-15 дни (в зависимост от температурата и влажността) до един месец; в изпражнения от няколко седмици до седем месеца.

Понастоящем в страната и чужбина се регистрират огнища на ротавирусна инфекция, причинени от вода и храна. Ротавирусите се намират във водата на реки, езера, морета, подземни води, чешмяна вода, определени хранителни продукти (мляко и др.).

Възможна е реализация в някои случаи на капене, прах и други пътища на ротавируса.

Ротавирусите са известни също като един от основните етиологични агенти при вътреболнични (нозокомиални) огнища на остър гастроентерит. В болници с различен профил до 50-60% от болните деца могат да се заразят. Има случаи на огнища в родилните домове. Често засяга деца, които са на изкуствено хранене, страдащи от остри и хронични заболявания, с различни видове имунен дефицит.

Имунитет на чувствителност. Хората от всички възрастови групи са податливи на ротавирус. Най-голяма чувствителност се наблюдава при деца на възраст 6 месеца. до 2 години. Антителата към ротавирусите се откриват при 50-60% от децата на първата година от живота, на възраст над 3 години - повече от 90% и при почти всички възрастни. Въпреки това, според литературата, наличието на антитела в серума показва основно само среща на човешкото тяло с ротавирус, а не наличието на имунитет, тъй като дори при значително ниво на хуморални антитела, са възможни многократни заболявания. Имунитетът с ротавирусна инфекция не е напълно изяснен. Счита се, че резистентността към инфекция се дължи главно на локалния имунитет на тънките епителни клетки на червата, което е свързано с присъствието на секреторни антитела от клас IgA. Тези антитела се намират и в млякото на кърмещата майка и очевидно служат като фактор при пасивната имунизация на новородените, които при липса на клинични прояви на болестта с изпражнения, могат да отделят значителни количества ротавируси в околната среда и да заразят недоносените бебета и децата с неблагоприятен преморбиден фон. Ротавирусите от различни серотипове не създават кръстосан имунитет и затова едно и също дете или възрастен може да има повторни заболявания, дължащи се на други серотипове на вируса. Нестабилният характер на имунитета при пациенти с ротавирусен гастроентерит също е отбелязан, многократните заболявания често се записват 1–1,5 години след инфекцията.

Особености на епидемичния процес с ротавирусна инфекция:

- повсеместното разпространение на територията;

- тежка сезонна зима или зима-пролет;

- ниска инфекциозна доза на патогена и високи огнища в организирани групи;

- увреждане на лица от всички възрастови групи;

- голяма част от случаите при деца под 2-годишна възраст с максимално откриване на заболявания сред децата от втората половина на живота;

- висока активност на водните и вътрешните пътища на пренос;

- местност на домашни огнища, предимно ограничени до семейство;

- възможността за асимптоматична изолация на ротавирусите при деца и възрастни;

- възможността за вътреболнична инфекция с участието на медицински персонал и родители на болни деца.

Клиничната картина на ротавирусната инфекция има много общо с клиничните прояви на остри чревни заболявания с различна етиология, което затруднява диагностицирането на това заболяване. Въпреки това, съществуват редица характерни различия, които позволяват своевременно да се подозира тази болест и правилно да се провеждат антиепидемични и терапевтични мерки.

Инкубационният период е кратък и продължава от 15 часа до 3 - 5 дни, но най-често - 1 - 3 дни.

Повечето пациенти имат остро заболяване, когато целият комплекс от симптоми се развива през първите дни на заболяването. При малки деца е възможна подостра поява, характеризираща се с появата в първите дни на заболяването с 1 или 2 симптома и добавянето на останалите от 2 до 3 дни от заболяването. Най-патогномоничен за ротавирусна инфекция е увреждане на стомашно-чревния тракт, което при 60-70% от пациентите се съчетава с развитието на симптоми на увреждане на дихателните пътища. Понякога катаралните симптоми могат да предшестват 3-4 дни на чревна дисфункция. Респираторният синдром се характеризира с умерена хиперемия и зрелост на фаринкса, меко небце и небцето, назална конгестия, кашлица, която, за разлика от ARVI, е по-слабо изразена, няма тенденция да се увеличава и е краткотрайна (4 - 5 дни). Диария се появява при 95-97% от пациентите. За ротавирусна инфекция се характеризира с развитието на гастроентерит, по-малко ентерит. Столът е обикновено течен, воден, пенлив, слабо оцветен, без примеси или с малко количество слуз. При малки деца преобладава водната диария, което обяснява по-честото развитие на ексикоза в тази възрастова група. Честотата на изпражненията средно не превишава 4 до 5 пъти на ден, но може да достигне 15 до 20 пъти при по-малките деца. Продължителността на диарията при възрастни и по-големи деца е 3 - 7 дни, при кърмачета често трае до 10 - 14 дни. Повръщането е кардинален симптом и се наблюдава при 80% от пациентите с ротавирусна инфекция. Най-често се появява едновременно с диария или предхожда. Повръщането често се повтаря, но краткосрочно (1 - 2 дни). Повтарящото и неконтролируемо повръщане за тази инфекция не е типично и често показва смесена инфекция. Температурата, като правило, не надвишава 38,5 - 39 ° C и се нормализира с 3-4 дни болест. Най-характерните признаци на обща интоксикация са слабост, летаргия, слабост, главоболие, замаяност. Тежестта на заболяването се определя от развитието на изотонична екзикоза, I - II степен, по-рядко III степен, което е по-често при кърмачетата. В същото време загубите на електролит (Na и K) са малки, което трябва да се има предвид при провеждането на рехидратираща терапия.

4. Диагностика и диференциална диагноза

Обективно изследване при пациенти отбеляза летаргия, конюнктивна хиперемия и съдова инжекция от склерата. Езикът е умерено покрит, сух. Коремът е мек, умерено болезнен при палпация в областта на тънките черва. Черният дроб и далака не се увеличават. Слепи и сигмоидни дебелото черво са меки, безболезнени. Кръвното налягане е намалено. Пулсът не е претоварен, а по-скоро има склонност към относителна брадикардия. Няма менингеални явления. В периферната кръв, в самото начало на заболяването, може да възникне умерена левкоцитоза, от 2 до 3 дни от заболяването има тенденция към левкопения с намаляване на броя на левкоцитните проби и увеличаване на броя на лимфоцитите и моноцитите, ESR не се ускорява.

В лабораторните анализи на урината се наблюдава лека албуминурия, бързо преминаващ микрогематурия, леко увеличение на броя на левкоцитите и възможен е появата на хиалинови цилиндри. Промените в урината са в съответствие с тежестта на заболяването и дехидратацията.

Микроскопското изследване на изпражненията, броят на левкоцитите не надвишава 10 - 15 в зрителното поле, има примес на слуз.

Ректороманоскопично е възможно да се установи умерена хиперемия на лигавицата на ректума и сигмоидния дебел без фокални промени.

Ротавирусният гастроентерит се разделя на тежест, която се определя от интензивността на диарията и причинената от нея дехидратация, както и от тежестта на общата интоксикация. Има три степени на тежест на ротавирусния гастроентерит: лек, умерено тежък и по-рядко тежък.

Диференциалната диагноза се извършва със салмонелоза, холера, дизентерия, хранителни токсикоинфекции, причинени от условно патогенни микроорганизми, персиниоза и други вирусни гастроентерити.

Стомашно-чревната форма на салмонелозата се характеризира с едновременно заболяване на хора, които ядат продукти с ниско качество. Обикновено остра поява: хипертермия, тежки втрисания, повръщане, тежка коремна болка, обилно фетизирано изпражнение, което запазва фекалния си характер, неутрофилна левкоцитоза с изместване на левкоцитната формула наляво. При салмонелоза, няма промени в лигавицата на фаринкса, черният дроб обикновено се увеличава. Изолирането на патогена при бактериологичното изследване на фекалии, повръщане или стомашна промивка решава диагнозата.

Според много клинични признаци на маса и бързина на заболяването, ротавирусен гастроентерит може да наподобява холера. Но ротавирусната инфекция се отличава с по-лек курс, и по-специално от факта, че не развива състоянието на алгида, както и от наличието на типични промени в лигавицата на орофаринкса.

Най-важни са резултатите от бактериологичното изследване в случай на откриване на Vibrio cholerae. Подобна е ситуацията и с NAG-инфекцията.

Бактериалната дизентерия се характеризира с остра коремна болка, чести, понякога фалшиви, подтискащи, изпражнения, смесени със слуз и кръв, със сигмоидит, постоянна фебрилна реакция, патологични промени в дисталната част на дебелото черво според ректоскопия. Всички тези признаци, както и резултатите от бактериологичните изследвания, правят сравнително лесно провеждането на диференциална диагностика за колитната форма на дизентерията. При стомашно-чревната форма на дизентерията стойността на бактериологичните изследвания се увеличава драстично.

Особено трудни са диференциалната диагностика на ротавирусния гастроентерит и токсикоинфекциите, предизвикани от храните, причинени от опортюнистични патогени, предвид недостатъчното познаване на клиничната картина на тези заболявания. Според диагностичната значимост на лабораторните изследвания, предимство трябва да се даде на положителни резултати от вирусологични и имунологични изследвания, потвърждаващи ротавирусния характер на заболяването, а не върху откриването на условно патогенни бактерии в изпражненията на пациента.

За стомашно-чревната форма на периниоза е характерно по-постепенно начало, присъствието, наред с гастроентерит, на болки в мускулите и ставите; черният дроб обикновено се увеличава; изпражненията са вискозни поради значителна смес от слуз, а понякога и кръв. В кръвта се забелязва левкоцитоза; ESR се увеличи.

Гастроентеритният синдром може да се прояви при някои вирусни заболявания. Те включват аденовирусна инфекция, която в допълнение към чревните лезии се характеризира с конюнктивит, ринит, фарингит, тонзилит, бронхит, пневмония, увеличаване на цервикалните лимфни възли, черния дроб, далака, продължителната треска.

От ентерит и гастроентерит, причинен от ентеровируси на Koksaki и ECHO, ротавирусният гастроентерит се характеризира с моносиндромна клинична картина, при която чревните увреждания заемат водещо място. За разлика от това, по време на епидемични огнища на ентеровирусния характер се забелязва наличието на различни клинични форми на заболяването, "многообразието" на клиничната картина, при което симптомите на увреждане на мембраните на мозъка, кожата и горните дихателни пътища могат да играят важна роля.

Диференциалната диагноза на ротавирусна инфекция с колибацилоза при деца е най-трудна и може да се основава на следните критерии:

- по-голямо остро начало на ротавирусна инфекция в сравнение с колибацилоза, особено причинена от ентеропатогенна колибацилоза;

- по-бързо възстановяване от ротавирусна инфекция, дори при малки деца;

- по-висока честота на респираторния синдром при ротавирусна инфекция, но с по-малка тежест и продължителност.

Най-голямата трудност е диагностицирането на смесени ротавирусно-бактериални инфекции, делът на които през зимните сезони на годината е доста голям (7 - 10% от всички ОКИ).

Особеност на клиниката на смесените инфекции е наличието на симптоматични комплекси, характерни за двете комбинирани инфекции: повишаване на симптомите на интоксикация, поява на признаци на възпалителни промени в лигавицата на тънкото и дебелото черво и по-бавно възстановяване.

Хоспитализацията на деца и възрастни със съмнение за ОКИ, причинена от ротавируси, се извършва според клинична (тежест на заболяването) и епидемиологични показания (наличие на слаби деца в средата на пациента, деца на първа година от живота, посещение на детски заведения в предучилищна възраст, работници в хранително-вкусовата промишленост и приравнени към тях лица неспособността да се спази антиепидемичният режим у дома и др.). Деца под една година с тежки симптоми на OCI се хоспитализират първо. Отделна хоспитализация на пациенти със съмнение за ротавирусен гастроентерит и остри чревни инфекции от различна етиология (отделни отделения, кутии) е задължителна. Трябва да се спазва принципът за еднократно пълнене на камери (кутии).

Лечение на пациенти с ротавирусен гастроентерит, като се вземат предвид съществуващите идеи за патогенезата на това заболяване, включва щадящ режим и компенсация за нарушения на функционалното състояние на червата, възстановяване на хидроелектролитен баланс и детоксикация на организма.

По време на острия период на заболяването се предписва 4-Б диета, при която се наблюдава рязко ограничаване на въглехидратите (до 200 g) и увеличаване на количеството протеин (до 150 g) с леко понижение на калоричното съдържание (2400 кал.). Количеството захар е ограничено до 40 г на ден, зеленчуци и плодове. Млякото е изключено. Солта не е ограничена.

Показана е целта на такива домашни храносмилателни мултиензимни препарати като ораз, солизим, сомилаза, която при лечението на пациенти с ротавирусен гастроентерит не е по-ниска от вноса (панзинорм, храносмилателна, празнична, триензимна и др.).

Необходимо е да се оцени степента на дехидратация на организма и да се проведе терапия, насочена към попълване на излишните загуби на вода и соли. Когато дехидратацията е I - II степен според V.I. Глюкозо-електролитни разтвори се дават орално на Покровски (рехидрон глюкозолан), като се отчита загубата на течности и електролити, и при дехидратация на III степен е необходимо да се започне лечение с интравенозно приложение на водно-солеви разтвори (тризол, квартозол, хлозол, ацезол) и др.

Тактиката на въвеждане на разтворите се извършва в съответствие с принципите на рехидратиращата терапия.

За да се стабилизира нормалното кръвообращение и детоксикация, можете да въведете колоидни разтвори (гемодез, полиглукин, реополиглукин).

Трябва да се подчертае, че предписването на антибактериални лекарства, ако няма съпътстваща бактериална инфекция, не е оправдано.

Препоръчително е да се използват адсорбенти и стягащи лекарства.

Лечението на вирусна инфекция понастоящем не се развива.

Екстрактът от реконвалесцентите се извършва след стабилна (в рамките на 2 - 3 дни) нормализация на изпражненията и изчезване на всички други клинични симптоми на основното заболяване при липса на усложнения.

На децата, които посещават предучилищни институции, работници на хранителни обекти и приравнени към тях лица, се дава еднократно вирусологично изследване след изчезване на клиничните симптоми.

Останалите контингенти на пациентите не подлежат на задължително лабораторно изследване.

6. Лабораторна диагностика

Лабораторната диагностика на ротавирусен гастроентерит в момента не е трудна. Бързото развитие на клиничния синдром и краткосрочния болничен престой диктуват необходимостта от използване на бързи методи за определяне на етиологията на заболяването. Повечето от лабораторните диагностични методи, препоръчани в това ръководство, ви позволяват да откривате ротавируси през първия ден. Изборът на метод във всеки случай се определя от техническото оборудване на лабораторията, както и от наличието на подходящи реагенти.

Традиционните методи за откриване на серологични промени в серумите на пациенти (реакция на неутрализация, инхибиране на хемаглутинация и фиксация на комплемента) са важни при ретроспективния анализ на заболяването. Следователно, за ранната серологична диагностика на ротавирусна инфекция се препоръчва определяне на антитела от IgM клас.

Обект на вирусологичното изследване на болен е обикновено изпражненията. Наличието и разпространението на ротавирусите в околната среда се откриват чрез изследване на проби от почвата, храните и водата (отпадъчни води, води от естествени и изкуствени водоеми, питейна вода).

6.1. Откриване на ротавируси в клиничен материал

и в екологични проби

6.1.1. Подготовка на пробата за тестване; вземане на проби

Когато се вземат проби за вирусологични изследвания, са изпълнени някои общи изисквания, като се вземат мерки за защита на материала от замърсяване. Пробите се вземат само в стерилни чинии с плътна гумена запушалка, подсилена лепилна мазилка. Транспортирайте проби в контейнери с лед или хладилен агент.

6.1.2. Подготовка на суспензията, изясняване,

почистване на проби, отстраняване на бактериалната флора

Приготвянето на проби от фекалии за изследване върху ротавирус включва получаването на 10% суспензия, хомогенизиране, центрофугиране при 3000 rpm. в рамките на 30 минути за отстраняване на бактериалната флора. При изследване на обекти от околната среда и хранителни продукти се извършва предварителна концентрация на изследваните материали.

6.1.3. Концентрация на вирусни частици във водни проби

Концентрацията на ротавирусите е важно условие за повишаване на ефективността на тяхното откриване във водните обекти на околната среда.

Методът за концентриране на ротавируси с използване на адсорбционна хроматография върху порест силициев диоксид - макропорьозно стъкло (MPS) - е прост и удобен, като се използват водни обеми от 0,1 до 10 литра. Когато пробата се премине през слой от MPS, вирусът се сорбира върху повърхността на стъклото. За елуиране на вируса като се използват разтвори, които имат способността да причиняват десорбция на вируса. Вирусът се отстранява от стъклото с малък обем разтвор, което води до концентрация от десетки до стотици пъти в сравнение с оригиналната проба.

За подобряване на адсорбционните свойства, вътрешните препарати от стъкло на марката MPS-1000 VGH се третират както следва: приготвя се смес (1: 1) от 3% НО и 6 М НС1. Стъклото се напълва с приготвената смес в размер на 1 обем стъкло за 2 обема от сместа. Сварете в качулка (без запушалка) в продължение на 1 час, като спазвате предпазните мерки. Измийте до неутрално рН с дестилирана вода. Изсушава се при 100 ° С.

Стъклена колона, предварително обработена със силиконова течност, напълнена със стъкло (2 - 3 см), Напоена в дестилирана вода. Към тестовата проба (3 1) се добавя 1 М разтвор на MgCl до крайна концентрация от 0,05 М. Водата се прекарва през колоната със скорост 150-500 ml / час, регулирайки скоростта на потока с помощта на скоби. Прекарайте през колоната 10 ml елуиращ разтвор: месен екстракт 3%, рН 9.0; или бульон с триптозен фосфат 1%, рН 9.0; или Tris HCI 0.1 М, съдържащ 2 М NaCl, рН 11.0 (разтворите са изброени по реда на намаляване на техните елуиращи свойства). Сорбатират се фракциите с обем 1 ml, рН в фракциите се довежда до неутрални стойности.

6.2. Откриване на вирусни частици с помощта на електронна микроскопия (EM) и имуноелектронна микроскопия (IEM)

Тъй като съдържанието на ротавирусните частици в изпражненията на типичните пациенти обикновено е високо в първите 2-3 дни от заболяването, методът ЕМ е широко използван за откриване на ротавирус, който може да се използва за откриване на ротавирусни частици без допълнителна концентрация на фекалната суспензия.

За приготвяне на лекарства, капка от изследваната 10% суспензия се нанася върху плоча от стоматологичен восък или восъчна хартия. На капка от филмовия субстрат се нанася обект на електронно-микроскопска мрежа. След 1 - 3 минути решетката се измива върху капка дестилирана вода и контрастен разтвор (2% разтвор на фосфорутинова киселина, доведен до рН 6,5 - 6,6 с 1 NKOH), чийто излишък след 30-40 секунди. отстранете филтърната хартия и мрежата се изсушава. Разглеждането на препаратите се извършва в електронен микроскоп с инструментално увеличение от 30 - 50000x.

Ротавирусите се откриват много лесно чрез ЕМ изследване на фекални суспензии с характерни размери и морфология на вирусните частици. Ротавирусите трябва да се диференцират от различни вирусни частици и вирусоподобни образувания, частици от бактериофаг и бактериални флагели, намерени във фекален материал.

Използването на IEM технология дава възможност в някои случаи не само да се увеличи процентът на откриване на ротавируси, но и да се докаже тяхната етиологична роля. За IEM проучването, 0,1 ml от разредения имунен серум на животните 1: 5 се смесва с 0,4 ml 10% екстракт от фекали. Сместа се инкубира за 1 час при стайна температура и след това в продължение на 12 часа при 4 ° С, след което се центрофугира в продължение на 90 минути. при 15,000 rpm Супернатантата се отцежда и получената утайка се ресуспендира в няколко капки дестилирана вода, контрастира се с 2% разтвор на фосфоретуинова киселина (рН 6.5) и се поставя върху решетките на обекта; излишната влага се отстранява с филтърна хартия. Изследването на лекарствата се извършва в електронен микроскоп с инструментално увеличение от 50000x, като се наблюдават най-малко пет клетки на обектната мрежа. В случай на положителен резултат, ротавирусните частици се откриват в препарати под формата на специфични клъстери (имунни комплекси).

6.3. Откриване на ротавирусен антиген в тестовия материал

6.3.1. Получаване на имунореагенти

Хиперимунните серуми и специфичните ротавирусни имуноглобулини се получават чрез имунизация на зайци, морски свинчета, пилета.

Антиген за имунизация се приготвя по следния начин: 5 ml културална суспензия на ротавирус SA-II се третира с трипсин, добавя се към 1,5-литрови матрачни колби с монослой от хетероплоидни клетки на бъбрека на зелена маймуна 4647, инкубира се в продължение на 60 минути при 37 ° С; добавете поддържаща среда без серум и инкубирайте за 24 до 48 часа при 37 ° С. Цялата биомаса се подлага на 3-кратно замразяване или ултразвук, добавя се ПЕГ М 6000 до 8-10% концентрация, оставя се 20 часа при 4 ° С, след това се центрофугира при 10,000 rpm. 2 часа Пелетата се ресуспендира в PBS (1/30 - 1/50 от обема на биомасата). След почистване с фреон 113, водната фаза се използва за имунизиране на животни и като антиген в имунологични изследвания. Концентратът в обем от 1 ml съдържа най-малко 10 вирусни частици.

Имунизация на зайци: зайци се инжектират интравенозно с 2 ml ротавирусен препарат на ден 1, 7, 35, 42 и се взема кръв на 49-ия ден след началото на имунизацията. В дни 1 и 35 антигенът се инжектира с допълнителен пълен адювант на Freund в няколко точки от гърба.

Имуноглобулиновата фракция се утаява от хиперимунен заек серум с 10% воден разтвор на полиетилен гликол (PEG) с молекулно тегло 6000. Утайката се събира чрез центрофугиране, разтваря се и се диализира срещу 0,01 М К-фосфатен буфер (рН - 7,4) с 0,01 М Nace ( FSB). Концентрацията на имуноглобулини се определя спектрофотометрично.

Имунизация на морски свинчета: животни се инжектират интрамускулно с 0.5 ml концентриран ротавирусен препарат с равен обем на пълния адювант на Freund на 1.14 и 28 ден, вземане на кръвни проби две седмици след последната имунизация.

Имунизация на пилета: 20-седмични пилета от кокошки носачки от хибриди на бялата порода Leghorn Zarya-17 се имунизират интравенозно на 1, 14, 28 дни. По време на първата имунизация, антигенът се прилага допълнително интрамускулно в смес с равен обем на пълния адювант на Freund. Максималното количество антитяло в жълтъка се наблюдава след третата имунизация. Пилета могат да се използват постоянно след реиммунизация.

Изолиране на пилешки имуноглобулини: жълтъкът се отделя от протеина в черупката или фунията на Бюхнер и се промива с чешмяна вода. Жълтъкът (10 ml) се прехвърля в центрофужна епруветка, добавя се двойно количество (20 ml) от FSB и се смесва добре. PEG 6000 се прилага до концентрация 3.5% (w / v) и се смесва за 10 минути. при 14000 g. Супернатантът се филтрува през филтърна хартия в градуиран цилиндър. Добавя се допълнителен PEG 6000 до крайна концентрация от 12% и се разбърква. Утаените имуноглобулини се събират чрез центрофугиране (10 min. 14,000). Утайката се разтваря в 5 ml FSB (1/2 обем жълтък). Концентрацията на протеин в препарата обикновено е 6 - 12 mg / ml.

6.3.2. Метод на ензимен имуноанализ (ELISA)

Методът на ензимен имуноанализ (ELISA), базиран на използването на антитела, белязани с ензимна молекула (пероксидаза), е един от най-често използваните и ефективни и специфични методи за откриване на вирусен антиген. Обикновено се използват директни и индиректни "сандвич" - опции. Ензимен маркер, открит в цветна реакция със субстрата. Директният вариант ELISA е по-бърз от индиректния, но е по-малко чувствителен и специфичен. При формулирането на непряк вариант се използва анти-специфичен търговски конюгат на имуноглобулини с ензим; За да се предотвратят неспецифични взаимодействия между конюгата и антителата, сорбирани на панела, е необходимо да има антивирусни серуми от два различни животински вида.

Непряк ELISA вариант: 0,1 ml анти-тромтаунови имуноглобулини от жълтъка на яйцата на имунизирани пилета на половина (48) от ямките се въвеждат в ямките. В другата половина, имуноглобулини от яйца, поставени преди имунизация, се въвеждат като отрицателна контрола. Сорбцията на имуноглобулини се извършва от разтвор с концентрация от 5 μg / ml в PBS през нощта при 4 ° С. Съдържанието на ямките се отцежда, ямките се промиват с PBS-T и 0,1 ml от тестовата проба се прилагат в PBS-T с 1% BSA и 0,01 М EDTA към гнездата с антиротавирус и нормални имуноглобулини и се инкубират за 1 час при 37 ° С.

След промиване, 0,1 ml от заешки анти-ротавирусен серум, разреден до 1: 1000-1: 25000, се добавя към гнездата в PBS-T буфер. Оптималното разреждане на серума се определя в предварително определени експерименти. Панелите се затварят и инкубират в продължение на 2 часа при 37 ° С. Ямките се промиват и се прибавят 0,1 ml от търговския препарат на белязани с пероксидаза антитела срещу заешки IgG при концентрация от 1 до 2,5 μg / ml в съдържание на пероксидаза в PBSB-T-BSA и се инкубират в продължение на 1 час при 37 ° С. Ямките се промиват, прибавят се 0,1 ml прясно приготвена субстратна смес (О-фенилен-диамин 0,5 mg / ml в 0,05 М Na-цитратен буфер рН 5,0; HO - 0,03%). бъдете внимателни!)) и инкубирайте при стайна температура на тъмно в продължение на 30-40 минути. Ензимната реакция се спира чрез добавяне на 0.05 ml от 3 М HSO. Резултатите от реакцията се вземат под внимание визуално или спектрофотометрично. Пробите се считат за положителни, чиято оптична плътност е не по-малко от 2 пъти оптичната плътност на отрицателната контрола.

6.3.3. Метод на коаглутинация

Този метод се основава на способността на протеин А Staphylococcus aureus от щам Cowan да се свърже с Fc-фрагмента на IgG и, по време на образуването на специфичен комплекс антиген-антитяло, предизвиква феномен на аглутинация.

За формулиране на реакцията на коаглутинация се използва търговски сух стафилококов реагент, съдържащ протеин А (Пастьорски изследователски институт по електрохимична медицина, Ленинград), който се рехидратира преди употреба в 0,1% разтвор на метиленово синьо.

Преди това всяка серия от хиперимунен серум се изследва за наличие на антистафилококови антитела. За да направите това, върху стъклен слайд смесете равни обеми серум при разреждане на 1: 500 и 10% суспензия на стафилококи. Вземете под внимание резултатите в рамките на 5 минути след аглутиниране на образованието. За работата на избрания серум, които не съдържат антистафилококови антитела при разреждане 1: 500. За приготвяне на диагностикум се смесват 0,01 ml анти-ратавирусен серум, разреден 1:10 с FSB, с 0,5 ml 10% суспензия от стафилокок, държани при стайна температура за 1 час, след което се добавят 9,5 ml FSB (diagnosticum). По същия начин, стафилококът е сенсибилизиран с преимунен серум (контролен реагент). Диагностични и контролни реагенти се използват в реакцията на РКА и TRKA.

За поставяне на RCA в U-образни ямки на панела, се правят 0.05 ml PBS рН-7.4; в две ямки правят Takacchi микротитър или дозатор 0.05 ml от 10% суспензия от изпражненията и се приготвят серийни двукратни разреждания от 1: 2 - 1: 256. Към кладенчетата от първия ред се добавят 0,05 мл диагностикум и в ямките на втория ред 0.05 мл контролен реагент. Панелите се покриват с капак и се инкубират в термостат при 37 ° С - 3 часа. Във всеки експеримент, проба от суспензия от фекалии положителна и отрицателна за ротавирус, както и лизати на клетки, заразени с ротавирус SA-II, тествани по-рано с електронна микроскопия.

Разглеждане на реакцията: Резултатите се считат за положителни, когато се открие аглутинационен “чадър” заедно с диагностикума, с отрицателен резултат или 4-кратно намаляване на титъра успоредно с контролния реагент. Резултатите се считат за отрицателни, когато дисковете се формират в двата паралелни реда. За да се елиминира неспецифична коаглутинация в сдвоените редове, суспензията с фецеса се адсорбира с равен обем от нормален заешки серум при 37 ° С за 2 часа, последвано от нагряване при 80 ° С в продължение на 45 минути. След това отново се опита в реакцията на коаглутинация.

6.3.4. Метод на твърдофазна реакция на коаглутинация (TRKA)

Този метод за откриване на ротавирусни антигени се основава на принципите на имунологичния метод на твърдата фаза (виж 4.3.2). Въпреки това, за разлика от последните, TRCA не използва ензима като етикет, а диагностичен и контролен реагент (виж 4.3.3).

За поставяне на TRKA се използват имунологични панели с u-образни кладенци. За сенсибилизиране към ямките се добавят 0.1 ml хиперимунен серум, разреден с 0.01 М карбонатно-бикарбонатен буфер (рН 9.6) 1: 1000. Серумните панели се оставят за 2 до 3 часа при 37 ° С. Несвързани с твърдата фаза антитела се отстраняват чрез промиване три пъти за 3 минути. FSBT. След това се правят 0,05 ml от изследваните, както и очевидно положителни и отрицателни проби (2 ямки за всяка проба) в ямките и се оставят за 2 часа при 37 ° С, за да се образуват комплекси антиген-антитяло. Несвързаният антиген и свързаните с него примеси се отстраняват чрез тройно пране на PBS. След това в една ямка се добавят 0,05 ml 0,5% стафилококов диагностикум, във втората (контролна) 0,05 ml 0,5% суспензия от стафилококи, чувствителни с преимунен серум (виж 4.4.3). Инкубирането се извършва или за 1 до 2 часа при 37 ° С, последвано от поставяне за 1 до 3 часа при 4 ° С, или за 18 до 24 часа при 4 ° С. Резултатът от реакцията на аглутинация се взема под внимание визуално: при положителна реакция аглутинираните бактерии образуват чадър; с отрицателна реакция - бактериите се утаят напълно под формата на диск.

6.3.5. Метод за индиректна хемаглутинация

При този метод откриването на ротавирусен антиген се основава на използването на диагностикум на еритроцитни антитела, който е еритроцити от овце, чувствителни от имуноглобулиновата асцитна течност на бели плъхове, имунизирани с ротавирус SA-II.

Двукратни разреждания на 10% фекална суспензия в ямките на панела се тестват с еритроцитен диагностикум. Аглутинацията на диагностикум на еритроцитите показва наличието на ротавирусен антиген в пробата. Подробно описание на процедурата за формулиране на PHA е изложено в инструкциите, приложени към комплекта за подготовка (Научно-производствено сдружение "Ростепидкомплекс", Ростов-на-Дон).

Комплектът Rotatest се основава на обратна пасивна хемаглутинация и е предназначен за откриване на ротавирус във фекалиите и за откриване на антитела срещу ротавирус в кръвните серуми.

6.3.6. Метод за имуноцитохимично откриване на ротавирус

Методът се основава на имунохимичното определяне на вирусния антиген, синтезиран в клетките в резултат на тяхната инфекция с вирус-съдържащ материал.

Предимството на метода в сравнение с ELISA е по-високата чувствителност, както и възможността за определяне и количествено определяне на инфекциозността на тестовата проба.

Поставяне на експеримента: трансплантираните клетки на бъбрека на зелена маймуна в концентрация от 3 до 10 клетки / ml правят 0.2 ml в кладенчетата на плоскодънни панели и се инкубират при 37 ° С (24 до 48 часа). След това клетките се промиват с Eagle-MEM среда. Тестовият материал се разрежда в Eagle-MEM среда, активира се за 1 час при 37 ° С в присъствието на 10 ug / ml трипсин и се добавя в 0,1 ml в най-малко 4 гнезда. Положителни контроли са ямките, в които е вмъкнат материалът, за който е известно, че съдържа ротавирус. Отрицателни контроли: ямки с неинфектирани клетки и ямки, в които се въвежда материал, подобен на теста, но не съдържащ ротавируси. Адсорбцията се провежда в продължение на 1 час при 37 ° С, след това средата се отстранява, клетките се промиват с Eagle-MEM среда. Добавят се 0,2 ml среда Eagle-MEM с 1 μg / ml трипсин в ямките и се инкубира в продължение на 48 часа при 37 ° С.

Клетките се промиват два пъти с физиологичен разтвор и се фиксират със студен (-20 °) 85% ацетон, инкубират се в продължение на 2 часа при -20 ° С, след това се отстранява ацетон. Панелът се промива 3 пъти с PBS, съдържащ 0.05% Tween 20 (PBS-T). Към ямките се прибавят 0,1 ml разредено 1: 1000 в анти-ротавирусен серум на PBS-T имунния бяс. Инкубира се в продължение на 2 часа при 37 ° С. След измиване на панела, 0.1 ml от белязано с пероксидаза анти-IgG заек антитяло (търговска подготовка) се добавя към ямките в ямка, при концентрация 2 μg / ml от съдържанието на пероксидаза в PBS с 1% BSA и се инкубира за 1.5 часа при 37 ° С. C.

Панелът се промива 2 пъти с PBS-T и 1 път с 0.05 М ацетатен буфер, рН 5.0. Към ямките се прибавят 0,1 ml прясно приготвен разтвор на пероксидазен субстрат, съдържащ 10 ml ацетатен буфер / 4 mg 3-амино-9-етилкарбазол (АЕС), разтворен в 0,5 ml ацетон и 0,01 ml от 33% водороден пероксид. (Внимание! Работата с AEC изисква внимание). Инкубирайте за 30-40 минути. на тъмно при стайна температура. Реакцията се спира чрез промиване на панела с дестилирана вода.

Отчитането на реакцията се извършва под светлинен микроскоп с малко увеличение. Отрицателните контролни ямки не трябва да съдържат оцветени клетки. Местните групи от оцветени клетки са огнища на вирусна инфекция.

6.3.7. Имунофлуоресцентен метод

За идентифициране на ротавирусен антиген, използвайки имунофлуоресценция, се използва клетъчна линия 4647. Клетките се отглеждат върху покривни стъкла или слайдове, затворени в пеницилинови флакони или епруветки. Заразената култура се инкубира при 37 ° С в продължение на 24 до 48 часа, след което чашките се отстраняват от флаконите, промиват се с 0.15 М физиологичен разтвор с добавяне на фосфатен буфер при рН 7.2, промиват се с дестилирана вода и се сушат на въздух. След това препаратите се фиксират в две смени (по 10 минути всеки) от химически чист ацетон, охладен до 4 ° С.

Препаратите се третират чрез косвен метод във влажна камера. Една капка от имунен ротавирусен заешки серум се прилага към културалните клетки и се инкубира в продължение на 30 минути. при 37 ° С, след това лекарствата се промиват три пъти във ФСБ и се отстранява излишната влага. Мокрите препарати се оцветяват със смес от равни обеми анти-FITC-конюгат и говежди албумин, белязани с родамин, и се инкубират за 30 минути. при 37 ° С. След трикратно измиване във ФСБ препаратите се изсушават на въздух. За да се елиминира неспецифична флуоресценция, антивирусният серум се адсорбира преди употреба с хомогенат от нормална клетъчна култура и FITC конюгатът се третира с активен въглен съгласно стандартни методи.

Като задължителни контроли се използват следните контроли: препарати от незаразени култури, третирани по подобен начин и препарати от заразени култури, третирани в първия етап на нормален и хетероложен антивирусен серум от същия вид като имунния серум до ротавирус.

В случай на положителни резултати се наблюдава ярка зелена флуоресценция в цитоплазмата на клетките.

6.4. Електрофоретичен метод на ротавируси

Методът се основава на идентифицирането на ротавируси, използвайки електрофореза на полиакриламиден гел на вирусни геномни РНК сегменти. Методът позволява диференциация на ротавирусните щамове въз основа на разликите в електрофоретичната подвижност на отделните РНК сегменти на различни изолати и поради това се използва широко в епидемиологични изследвания. Методът не изисква предварително култивиране на изолати, има висока чувствителност и абсолютна специфичност.

Методът е от особен интерес за епидемиолозите при изследване на групови заболявания на огнища на ротавирусна инфекция.

Тя може да се извърши на базата на лаборатории, оборудвани с апарати за електрофореза.

За анализа е достатъчен 0.2 - 0.5 ml 10 - 20% фекално суспензия. Суспензиите се третират с фреон 113 и се инкубират с проназа (0.2 mg / ml, 15 минути) в присъствието на натриев додецилсулфат (1%) и натриев етилендиаминтетраацетат (0.001 М). След добавяне на натриев ацетат (0.3 М), RNA се депротеинизира със смес от фенол: хлороформ-изоамилов алкохол и се утаява с 2.5 обема етанол (18 часа при -20 ° С или 2 часа при -70 ° С). Утайката се събира чрез центрофугиране, разтваря се във вода и се добавя дисоциационен буфер. Електрофорезата се провежда по метода на Laemmli в плаки с 10% гел. Сребърен нитрат (0.011 М) обикновено се използва за оцветяване на РНК в гел. След процедурата на проявление в гела се виждат 11 ленти от РНК, съответстващи на геномния сегмент на ротавируса.

6.5. Определяне на имуноглобулин клас M в серум

пациент с ротавирусна инфекция по метода на твърдата фаза

реакции на коаглутинация (TRCA)

В този случай в модификацията се използва принципът на реакцията на твърдофазна коаглутинация (виж 4.3.4): за сенсибилизиране на панелните ямки, се използват 0,1 ml търговски агнешки моноспецифичен серум срещу човешки IgM, при разреждане 1: 1000. Панелите се инкубират за 2-4 часа при 37 ° С. След това ямките се промиват с FSBT, напълват се с 3% разтвор на желатин и се оставят за 30 минути при 37 ° С. Ямките се промиват с FSBT и се получават 0.05 ml от изследваните, както и умишлено положителни и отрицателни серуми, разредени 1: 100 FSBT (2 дупки за всеки серум). При определяне на титъра на антителата се изследват двойни разреждания на изследваните проби (1:10 - 1: 1280). Панелите се инкубират в продължение на 2 часа при 37 ° С и след измиване, 0.05 ml диагностикум и контролен реагент се въвеждат в сдвоени ямки. Реакцията се взема под внимание след 1-2 часа (виж по-горе 4.3.4).

Същият принцип, модифициран от TRCA, се използва за тестване на IgA и IgG антитела за ротавирусна инфекция, както и за анализ на коластра и мляко за лактоглобулини.

Методът за определяне на клас М имуноглобулин в серума на пациента се използва както за ранна диагностика на явни форми, така и за диференциалната им диагноза с асимптоматични форми на ротавирусна инфекция.

7. Противо-епидемични мерки

Всеки случай на остра чревна инфекция, причинена от ротавируси, особено деца на първа година от живота, както и деца, посещаващи предучилищни институции, се нуждае от внимателен епидемиологичен анализ за идентифициране на източника, основните начини и фактори за предаване с цел навременно прилагане на антиепидемични мерки. в огнището.

Мерки, насочени към идентифициране и неутрализиране на източника на инфекция. Откриването на пациенти с подозрение за заболяването се извършва от лекари от всички лечебни заведения: при амбулаторни посещения, домашни посещения, медицински прегледи на деца в институции, болници и др. Идентифицираните пациенти са изолирани от детски групи. Медицинско наблюдение и лечение на пациенти могат да се извършват у дома или в болница. Деца, посещаващи детски заведения, освободени от болницата или завършили домашно лечение с отрицателни лабораторни тестове, се приемат в детски групи въз основа на удостоверение за педиатър. Деца, които са имали РГ и продължават да отделят ротавируси (или ротавирусен антиген) с изпражнения без клинични прояви на инфекция, могат да бъдат приети в детските градини и групите на детските градини и детските градини, подлежащи на организиране на непрекъснато медицинско наблюдение и повторно лабораторно изследване за 2 - 3 седмици. от началото на заболяването или изолирането на вируса.

Епидемиологично изследване на фамилни огнища на пациенти с ФГ се извършва с болестта на деца под 2-годишна възраст и възрастни от броя на определените контингенти. Епидемиологът посещава детска институция с изследване, ако има повторни случаи на небактериален гастроентерит.

Медицинско наблюдение на деца, общуващи с пациенти, се извършва в рамките на пет дни от датата на изолиране на последния болен.

Лабораторно изследване за ротавируси (антигени) на деца и възрастни, които са общували с пациенти, както в семейството, така и в организираните групи, се извършва по указание на инфекциолога и епидемиолога, ако има индикации (поява в семейството или в детския екип на повторни заболявания ОКИ с подобна клиника), грубо нарушение на санитарно-хигиенния режим, наличие в избухването на работници от хранителни предприятия и приравнени към тях лица и др.). Задължително лабораторно изследване подлежи на майката на болно дете през първата година от живота. Лица, при които ротавирусите (антигените) се откриват в изпражненията, подлежат на задълбочен клиничен преглед от специалист по инфекциозни заболявания. При липса на клинични прояви на заболяването, децата и служителите от екипа не са изолирани.

Служители на хранителни предприятия, водни услуги и др. по време на релабораторните изследвания и медицинския надзор се използват в рамките на съоръжението. Многократното лабораторно изследване на лица, екскретиращи ротавируси (антиген) с фекалиите, се извършва по предписание на инфекциолога и епидемиолога с интервал от 5-7 дни, като се използва цялостна лабораторна проверка.

Ако в детските заведения се появят групови заболявания, карантинните мерки се провеждат в рамките на 5 дни от момента на изолиране на последния пациент.

Институциите редовно провеждат санитарна и образователна работа, насочена към превенция на ротавирусна инфекция.

Мерки за прекъсване на механизма на предаване на инфекцията.

Проучванията показват увреждащ ефект върху ротавирусите при +70 ° С след 15 минути; когато са изложени на ултравиолетова радиация, ротавирусите също се инактивират след 15 минути.

По отношение на тяхната устойчивост към действието на широко използвани дезинфектанти, ротавирусите са близки до ентеровирусите и хепатит А. Следователно, в центровете на ротавирусна инфекция и в болниците, където има пациенти, е препоръчително да се проведат мерки за дезинфекция според схемите на лечение и да се използват средствата, препоръчани за вирусен хепатит. А и ентеровирусни инфекции (Приложение N 4 към Заповед на Министерството на здравеопазването на СССР N 752 от 07.08.181 г. и Заповед на Министерството на здравеопазването на СССР N 916 от 08.04.883 г.). Особено внимание следва да се обърне на правилното боравене с ръцете на лицата, които обслужват децата, както и на зърната, играчките, съдовете и други предмети за грижа за пациента.

Препоръчва се редовно облъчване с ултравиолетови лъчи. Ултравиолетовото лъчение обикновено се извършва с облъчватели - OBN-150 на 30 кубични метра. m стаи, OBP-300 60 cu. m стаи и др. Неекранираните захранвания са в размер на 1 - 1,5 W на 1 cu. m стаи в отсъствието на хора (с цел да се избегне увреждане на лигавицата на очите), защитени - в размер на 2 - 2,5 W на 1 куб. m, облъчването може да се извърши в присъствието на хора. Време за дезинфекция - 30 - 40 минути. Облъчването с въздух трябва да се извърши след почистване на помещението, смяна на спално бельо и други работи, свързани с образуването на прах аерозол.

В специализираните отдели на болничния персонал трябва да носят дихателни маски.

Организирането на санитарни и хигиенни мерки, насочени към предотвратяване на ротавирусна инфекция, се извършва в съответствие с настоящите инструкции и препоръки за други инфекции с фекално-оралния механизъм на разпространението на патогена.

Една от ефективните мерки за предотвратяване на ротавирусна инфекция при новородените е тяхното кърмене.

Не се извършва специфична профилактика на ротавирусна инфекция.